全部商品分類
１． 定義
數(shù)字ＰＣＲ（Ｄｉｇｉｔａｌ ＰＣＲ） 是一種基于單分子擴(kuò)增的核酸絕對(duì)定量技術(shù)，無需依賴標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過將反應(yīng)體系分割成數(shù)萬至數(shù)百萬個(gè)獨(dú)立微單元，實(shí)現(xiàn)靶基因的“有／無”二元判定，最終通過統(tǒng)計(jì)學(xué)方法計(jì)算目標(biāo)分子拷貝數(shù)。
核心設(shè)備：數(shù)字ＰＣＲ分析儀（包括微滴生成儀、ＰＣＲ擴(kuò)增儀、微滴讀取儀三部分）。
２． 技術(shù)原理
工作流程
樣本分割：
微滴式（ｄｄＰＣＲ）：油包水微滴（如Ｂｉｏ－Ｒａｄ ＱＸ２００）。
芯片式（ｃｄＰＣＲ）：微流控芯片分艙（如Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ ＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ? ３Ｄ）。
將含有核酸模板的ＰＣＲ反應(yīng)體系（含熒光探針／染料）分割至大量獨(dú)立微單元（微滴或微孔）。
主流分割技術(shù)：
ＰＣＲ擴(kuò)增：
微單元在傳統(tǒng)ＰＣＲ儀中進(jìn)行熱循環(huán)擴(kuò)增，靶分子獨(dú)立擴(kuò)增產(chǎn)生熒光信號(hào)。
熒光檢測(cè)：
陽性單元：熒光信號(hào)超過閾值（含靶分子）。
陰性單元：無熒光信號(hào)（無靶分子）。
使用高通量熒光檢測(cè)系統(tǒng)掃描每個(gè)微單元的熒光強(qiáng)度。
３． 核心優(yōu)勢(shì)
特性 說明 絕對(duì)定量 無需標(biāo)準(zhǔn)曲線，直接輸出目標(biāo)分子拷貝數(shù)／μＬ。 超高靈敏度 可檢測(cè)低至０．００１％的罕見突變（如腫瘤ｃｔＤＮＡ）。 強(qiáng)抗干擾能力 對(duì)ＰＣＲ抑制劑耐受性顯著高于ｑＰＣＲ。 精密度高 變異系數(shù)（ＣＶ）＜５％，適合微小差異檢測(cè)（如基因表達(dá)微調(diào)）。 多重檢測(cè)能力 支持多通道熒光（如ＨＥＸ／ＦＡＭ／Ｃｙ５），同時(shí)定量多個(gè)靶標(biāo)。 ４． 與傳統(tǒng)技術(shù)的對(duì)比
參數(shù) 數(shù)字ＰＣＲ（ｄＰＣＲ） 實(shí)時(shí)熒光ＰＣＲ（ｑＰＣＲ） 定量方式 絕對(duì)定量（直接計(jì)數(shù)） 相對(duì)定量（依賴Ｃｔ值／標(biāo)準(zhǔn)曲線） 靈敏度 可檢測(cè)單拷貝差異 通常＞１０倍濃度差異 抗抑制能力 強(qiáng)（抑制劑被分散至微單元） 弱（抑制劑影響整體反應(yīng)） 成本／通量 單次成本高，中低通量（１－９６樣本／次） 成本低，高通量（３８４孔板） ５． 核心應(yīng)用場(chǎng)景
（１）精準(zhǔn)醫(yī)療
腫瘤液體活檢：
超低頻突變檢測(cè)（如ＥＧＦＲ Ｔ７９０Ｍ、ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ）。
微小殘留病灶（ＭＲＤ）監(jiān)控。
無創(chuàng)產(chǎn)前診斷（ＮＩＰＴ＋）：
染色體微缺失／微重復(fù)（如ＤｉＧｅｏｒｇｅ綜合征）。
（２）病原體檢測(cè)
病毒超早期感染：ＨＩＶ／ＨＢＶ潛伏期低載量病毒定量。
耐藥株識(shí)別：結(jié)核分枝桿菌耐藥基因低頻突變。
（３）基因編輯驗(yàn)證
ＣＲＩＳＰＲ編輯效率精確定量（如脫靶率檢測(cè)）。
（４）環(huán)境與食品安全
轉(zhuǎn)基因成分痕量分析（＜０．１％）。
水體／土壤中病原微生物超敏檢測(cè)。
６． 技術(shù)局限性與挑戰(zhàn)
成本高昂：微滴生成芯片／專用試劑價(jià)格較高。
通量有限：?jiǎn)未芜\(yùn)行樣本數(shù)通常≤９６例（遠(yuǎn)低于ｑＰＣＲ的３８４孔板）。
操作復(fù)雜度：需嚴(yán)格分區(qū)防污染（尤其微滴操作）。
數(shù)據(jù)解讀要求高：需專業(yè)軟件分析微滴聚類（如閾值設(shè)定）。
７． 儀器關(guān)鍵組件
模塊 功能 微滴生成儀 將樣本分割為均一微滴（油包水體系）或加載至微孔芯片。 ＰＣＲ擴(kuò)增儀 提供標(biāo)準(zhǔn)熱循環(huán)條件（與傳統(tǒng)ＰＣＲ儀兼容）。 微滴讀取儀 高通量熒光掃描儀，識(shí)別每個(gè)微滴的熒光信號(hào)（多通道濾光片系統(tǒng)）。 分析軟件 自動(dòng)識(shí)別陽／陰性微滴，計(jì)算濃度并輸出結(jié)果（如ＱｕａｎｔａＳｏｆｔ?、ＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ?）。 ８． 發(fā)展趨勢(shì)
集成自動(dòng)化：一體化設(shè)備整合微滴生成、擴(kuò)增與檢測(cè)（如Ｓｔｉｌｌａ Ｎａｉｃａ系統(tǒng)）。
納升級(jí)微滴：提升分割密度（百萬級(jí)／樣本），進(jìn)一步提高靈敏度。
多重檢測(cè)升級(jí)：６色以上熒光通道，實(shí)現(xiàn)單次檢測(cè)＞１０靶標(biāo)。
成本降低：微流控芯片批量化生產(chǎn)推動(dòng)單次檢測(cè)費(fèi)用下降。
臨床認(rèn)證加速：ＦＤＡ／ＣＥ認(rèn)證試劑盒增多（如乳腺癌ＰＩＫ３ＣＡ突變檢測(cè)）。
９． 代表機(jī)型
品牌 型號(hào) 技術(shù)路線 通量 Ｂｉｏ－Ｒａｄ ＱＸ２００? Ａｕｔｏ ＤＧ 微滴式（ｄｄＰＣＲ） ８樣本／批次 Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ ＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ? Ａｂｓｏｌｕｔｅ Ｑ 芯片微孔（ｃｄＰＣＲ） ２４樣本／芯片 Ｓｔｉｌｌａ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｎａｉｃａ? Ｓａｐｐｈｉｒｅ 微滴式（Ｃｒｙｓｔａｌ?） ６樣本／芯片 Ｑｉａｇｅｎ ＱＩＡｃｕｉｔｙ? 納米板式 ２４／９６樣本 總結(jié)
數(shù)字ＰＣＲ分析儀憑借單分子絕對(duì)定量能力，在超低豐度靶標(biāo)檢測(cè)領(lǐng)域具有不可替代性，尤其推動(dòng)液體活檢、痕量病原體診斷等精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)發(fā)展。盡管存在成本與通量限制，但隨著微流控技術(shù)進(jìn)步和臨床需求增長，其正在從科研向臨床診斷快速滲透，成為分子診斷領(lǐng)域的“金標(biāo)準(zhǔn)”級(jí)工具。
注：文章來源于網(wǎng)絡(luò)，如有侵權(quán)，請(qǐng)聯(lián)系刪除
